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利用實時活細胞分析了解 B 淋巴細胞的特異性免疫

B 淋巴細胞

B 細胞在特異性免疫系統中發揮中心作用,負責產生針對入侵性病原體的抗原特異性免疫球蛋白。B 細胞的激活和增殖對抗體分泌至關重要,但持續性刺激也會導致 B 細胞白血病和淋巴瘤細胞的存活和生長,如霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。

Incucyte?實時活細胞分析系統已被用于評估 B 細胞的關鍵功能,包括細胞活化和聚集,抗體內化,以及通過細胞凋亡評估 B 細胞腫瘤的細胞凋亡,和免疫細胞殺傷實驗。


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活化和聚集

非貼壁B 細胞系的增殖。通過相差圖像對 WIL-2NS 細胞(一種 B 細胞系)的增殖進行定量。 與預期一致,起始匯合度由接種密度決定。 通過向每個加樣孔中接種已知數量的細胞,等待沉降后進行定量分析,完成匯合度測量的驗證。然后,對細胞進行滲透處理,測定三磷酸腺苷 (ATP) 的含量,提供二次讀數。研究發現,匯合度和細胞數量或 ATP 測定之間存在很強的相關性。

細胞凋亡(Annexin V 綠色染料)

檢測 B 細胞在細胞毒性實驗后的凋亡情況。在 Incucyte? Annexin V 綠色染料的存在下,獲取 WIL2-NS B 淋巴瘤細胞經溶劑或喜樹堿 (1 μM) 處理 24 小時后的代表性圖像。時間進程曲線顯示,Incucyte?? Annexin V 綠色染料發出的綠色熒光增加,表明喜樹堿誘導的細胞膜表面磷脂酰絲氨酸呈時間和濃度依賴性增加。

免疫細胞殺傷

測定白血病細胞的抗體依賴性細胞毒作用 (antibody dependent cellular cytotoxicity, ADCC)。存在免疫細胞時(未處理,或存在 IL-2 (10 ng/mL) 和 IL-12 (10 ng/mL) 或美羅華 (Rituxan) (15 ng/mL - 100 μg/mL)),表達 NucLight?紅色核標記物的 Ramos B 淋巴細胞的相位和熒光融合圖像??筛鶕t色熒光強度的損失來定量細胞毒性。

定量抗體內化

臨床上使用的抗體美羅華 (Rituxan) 的內化。使用 Incucyte? FabFluor 標記的美羅華(10 ng/mL 至 10 μg/mL)處理 Raji 細胞(B 細胞樣)(30, 000個/孔)。使用 20 倍物鏡在 12 小時內每 30 分鐘采集一次高清相位和紅色熒光圖像。所有數據顯示為至少 4 孔的平均值 ± SEM,時間進程數據顯示為歸一化的紅色區域(紅色區域/相位區域)。

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