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評估 NK 細胞的功能和表型

評估 NK 細胞的功能和表型

自然殺傷 (NK) 細胞作為人體對感染和癌癥的第一應答細胞,發揮著免疫監視的作用。了解 NK 的生物特性和活性是充分發掘其免疫應答潛力的關鍵。Incucyte??實時活細胞分析系統和 iQue? 3 高通量流式細胞儀可用于多種分析,如免疫分型、功能活性、細胞活性,以及細胞溶解效應蛋白、細胞因子和趨化因子分析。

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3D 免疫細胞殺傷

使用 Incucyte? 測定腫瘤球中的 ADCC效應。免疫細胞存在時(未處理條件下,或存在抗-CD3 (10 ng/mL)?和 IL-2 (10 ng/mL)?或赫賽汀 (0.08 ng/mL - 50 μg)),SKOV-3 Incucyte? NucLight 紅色腫瘤球的相位和熒光融合圖像??筛鶕t色熒光強度來定量細胞毒性。圖中數據顯示了激活的 T 細胞群和赫賽汀誘導的細胞毒性對腫瘤球產生的破壞作用。

從生理學相關的模型中獲得 NK 細胞介導的腫瘤細胞殺傷相關的生物學啟示


自然殺傷細胞介導的抗體依賴性細胞毒性作用,可誘導濃度依賴性靶細胞的死亡和顆粒酶的產生。

編碼的 Raji 腫瘤細胞 (2×104個/孔) 與來自兩個單獨供體的 PBMC (2×105個/孔) 共培養。PBMC 分別與以下三個抗CD20 抗體之一共同孵育:Ab-1 (IgG1)、Ab-2 (IgG1) 或陰性對照 Ab-3 (IgA2)。濃度范圍在 10 μg/mL - 0.128 ng/mL 之間。

4 小時后,使用人 NK 細胞殺傷分析試劑盒和 iQue? 3 分析 10 μL 樣品,以評估腫瘤細胞殺傷情況,同時還使用 iQue? 人 NK 細胞配套試劑盒測定了顆粒酶 A。(A,B) 來自兩個供體的靶細胞殺傷對抗體的響應不同。(C,D) 兩個供體細胞顆粒酶 A 的產生都呈現出濃度和供體依賴性。(E,F) NK 細胞上 CD16 的檢出量隨抗-CD20 抗體濃度的增加而降低。這可能是由 CD16 的脫落或 CD20 抗體的競爭導致。

細胞因子刺激增強了 NK 細胞介導的腫瘤細胞直接殺傷作用。將編碼的 K562 腫瘤細胞 (2×104個/孔) 與富集的(陰性選擇)人 NK 細胞共培養,人 NK 細胞已在單獨培養基(非活化 NK 細胞),或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15(已活化 NK 細胞)的培養基中孵育 16-18 小時,效靶比為 1:1 或 5:1。在 4 小時和 24 小時后,使用 iQue? 人 NK 細胞殺傷分析試劑盒和 iQue? 3 對 10 μL 樣品進行分析,以評估腫瘤細胞的殺傷作用。(A) 直方圖顯示了靶細胞在與非活化或細胞因子激活的 NK 細胞共培養 4 小時后的活性。(B,C) 圖中匯總了在與非活化或細胞因子激活的 NK 細胞共培養 (B) 4 小時或 (C) 24 小時后死亡腫瘤細胞的百分比。

同時進行 NK 細胞表面蛋白和細胞因子表達的定量測定


靶細胞的存在會誘導 NK 細胞的活化,并通過細胞因子刺激進一步增強。將編碼的 K562 腫瘤細胞 (2×104個/孔) 與富集的(陰性選擇)人 NK 細胞共培養,人 NK 細胞已在單獨培養基(非活化 NK 細胞),或含有 200 U/mL IL-2 和 100 ng/mL IL-15(已活化 NK 細胞)的培養基中孵育 16-18 小時,效靶比為 5:1。在共培養 24 小時后,取出 10 μL 樣品,使用 iQue? 人 NK 細胞殺傷分析試劑盒和 iQue? 3 進行分析。(A) 活化標志物(CD69 和 CD25)的表達情況。(B) IFNg 的產生和顆粒酶 B 的分泌情況。(C) 將 iQue? 人 NK 細胞配套試劑盒和 iQue? 人 NK 細胞殺傷分析試劑盒相結合,對其他額外的細胞因子進行平行評估。 ?NK = 自然殺傷細胞。T = K562 腫瘤靶細胞。

IL-2 和 IL-15 活化后,多種效應蛋白(如顆粒酶 B 和 CCL5 (RANTES))的表達和分泌增加。這些作用在靶細胞和 NK 細胞共培養時進一步增強。

資源和產品

Incucyte? 免疫細胞殺傷試驗

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Single Spheroid Assays for Live-Cell Analysis

Incucyte? 腫瘤球分析

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采用活細胞分析和流式細胞儀聯合分析免疫細胞...

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參考文獻

可供進一步參考的資料:

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NK 細胞和疫苗的發展

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