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小膠質細胞的表征

神經免疫學是一門研究發育期間、體內穩態和損傷或感染反應期間神經和免疫系統相互作用的學科。免疫細胞在神經元網絡的調節中具有至關重要的意義,例如小膠質細胞的突觸修剪是神經可塑性的重要組成部分。損傷、感染或內穩態失衡可導致神經炎癥和小膠質細胞活化,進而吞噬死亡或正在死亡的神經元和感染因子。慢性神經炎癥被認為是許多神經退行性疾?。ㄈ绨柶澓DY)的誘因,因此小膠質細胞的長期活化會危及神經元網絡。

Incucyte? 活細胞分析系統能對小膠質細胞進行各類形態學和功能表征。其全自動化圖像采集和分析有助于對凋亡神經元的小膠質細胞胞葬作用或生物顆粒吞噬作用進行可視化和動力學分析。小膠質細胞在趨化細胞因子作用下的遷移可以通過活細胞趨化遷移和侵襲實驗進行可視化和量化。無干擾型試劑可以維持細胞形態不受終點分析的干擾和限制,因而能直接以 96 和 384 孔的通量從培養箱中不間斷培養的每個細胞中收集更多數據。


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介紹神經免疫功能的Incucyte?分析方法

Incucyte??吞噬實驗

  • 生成被吞噬細胞的定量、可重復和特異性的測量數據
  • 通過圖像和視頻觀察和驗證吞噬細胞對細胞碎片和死亡神經元的動態清除
  • 使用 Incucyte? pHrodo? 橙色細胞標記試劑盒對目標進行無干擾型標記

  • 使用您選擇的微孔板形式的模型高效地研究整個吞噬過程

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Incucyte??趨化實驗

  • 將實時趨化性測量與形態的視覺評價聯系起來,可更深入地研究細胞表型
  • 僅需使用少量細胞在 96 孔板中分析敏感和罕見的細胞,重現性高
  • 無需固定、染色或細胞刮拭步驟,即可測量無標記或有標記的細胞遷移
  • 一站式解決方案,包括專用軟件和新型光學透明?Incucyte? ClearView 板

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白皮書:

借助實時活細胞分析技術揭示神經系統疾病和損傷的復雜性

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白皮書:

適用于神經科學家的活細胞分析技術:用于 iPSCs 和原代細胞模型的應用

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關鍵優勢

觀察并驗證小膠質細胞的吞噬

  • 通過用 pH 敏感的熒光探針獲取的圖像和視頻觀察小膠質細胞的吞噬情況。
  • 該方法適用于凋亡細胞、細胞碎片、蛋白質聚集體和生物顆粒的吞噬作用。

圖 1.觀察并驗證小膠質細胞的吞噬。iPSC 源小膠質細胞 (Axol BioSciences) 吞噬 pHrodo 橙色標記的凋亡 Neuro2A 細胞的延時可視化。 圖像驗證了凋亡的靶細胞進入小膠質細胞的細胞質的過程。 Neuro2A 靶細胞用?Incucyte??pHrodo 橙色細胞標記試劑盒標記,并用十字孢堿誘導凋亡。

對小膠質細胞吞噬和胞葬作用進行實時量化

自動分離由 Incucyte? pHrodo? 橙色試劑發出的熒光信號

結合?Incucyte? pHrodo 橙色細胞標記試劑盒,實時分析凋亡的 Neuro2A 細胞或 β 淀粉樣蛋白聚合體的吞噬反應
評估吞噬調節劑的作用機制

圖 2.對小膠質細胞吞噬作用進行實時量化。iPSC 源小膠質細胞 (Axol Bioscience) 吞噬 pHrodo 標記的凋亡神經元 (Neuro-2A) 的代表性熒光圖像。當靶細胞內化為酸性吞噬體時,觀察到細胞內橙色熒光增加;青色輪廓為分光遮片。pHrodo 標記的 Neuro2A 細胞的胞葬作用依賴于細胞數量。pHrodo 標記的 Aβ 聚集體的吞噬作用依賴于時間和濃度。

圖 3.吞噬調節機制的評價。BV-2 效應細胞胞葬凋亡的 Neuro2A 細胞(左圖)或大腸桿菌生物顆粒(中間圖)。細胞松弛素 D(上圖)對胞葬作用和吞噬作用均有濃度依賴性抑制作用, IC50 值分別為 0.16 μM 和 1.5 μM。相比之下,西侖吉肽(一種 aVb3 和 aVb5 整合素的抑制劑)選擇性地減弱了胞葬作用(IC50 值為 0.17 μM),且在實驗的最高濃度 (100 μM) 下對吞噬作用幾乎或沒有影響。這些數據支持了整合素在胞葬作用所需的細胞相互作用中發揮其功能,而不是細菌的吞噬作用。

評估小膠質細胞的趨化性和遷移

用圖像和視頻觀察小膠質細胞的趨化性

每個 96 孔趨化板僅需 1,000 至 5,000 個細胞,適用于數量少且昂貴的原代細胞群

圖 4.評估小膠質細胞的趨化性和遷移。Incucyte??ClearView 板上 iPSC 源小膠質細胞 (CDI) 的圖像??紫度缢{圈所示(左圖)。小膠質細胞向補體成分 5a (C5a) 的遷移有時間和濃度依賴性。

監測分化或活化后的形態變化

追蹤單核細胞向小膠質細胞分化過程中的形態變化

圖 5.iPSC 源單核細胞 (Axol BioScience) 分化為小膠質細胞的形態學變化展示。注意小膠質細胞的外觀變化。 12 天后,紅色箭頭所示為分支狀細胞,而黃色箭頭所示為較大的扁平變形蟲樣細胞。14 天內每隔 2 天給予細胞分化培養基,每 6 小時采集 20 倍放大的時相圖。

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應用

說明

商品目錄號

吞噬作用

Incucyte? pHrodo? 橙色細胞標記試劑盒,適用于吞噬作用

1 盒

4766

Incucyte? pHordo? 紅色細胞標記試劑盒

1 盒

4649

趨化作用

Incucyte? 趨化分析軟件模塊

1 個模塊

9600-0015

Incucyte? ClearView 96孔趨化板

1 塊板

4582

Incucyte? ClearView 96孔趨化板 – 10 塊裝

10 塊板

4648

所有應用

Incucyte? SX5 活細胞分析系統

包括圖像采集與分析系統:

  • 4 倍、10 倍和 20 倍物鏡
  • 擁有 16.4 TB 存儲空間的控制器
  • 高清三色綠色/橙色/近紅外光模塊

1 套系統

4816


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